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ELISA實驗洗滌技術要點

更新時間:2025-07-29      瀏覽次數:229

1. 手工洗板:
操作步驟:每次反應溫育后,將反應液吸出或甩干,然后在板孔中加滿洗液,放置2~3分鐘,再將洗液吸出或甩干并用吸水紙拍干。重復洗滌3~4次,最后拍干。
注意事項:

  1. 洗液量:加入的洗液量應以剛滿反應孔為限,避免孔口內有游離酶未洗凈。

  2. 避免孔間污染:吸液或甩干時要垂直,避免交叉感染。

  3. 吸水紙:使用一次性吸水紙,選擇不易脫落碎屑的材質。

  4. 拍干:拍干時用力要輕,避免抗原抗體復合物脫落,且時間應盡量短以防止酶失活。


2. 洗板機洗板:
優勢:速度快,條件恒定,人為因素少。
操作要點:

  1. 洗滌參數:確保所有反應孔的洗滌量相同,通常建議使用350μl洗滌液進行洗滌。

  2. 洗滌次數:一般要求洗滌4~5次,過多或過少都會影響結果,過多可能降低信號強度,過少則可能增加假陽性。

  3. 吸液高度:調整吸液高度,避免殘留過多未結合物。

  4. 吸頭類型:浮動洗頭可自動調整,剛性洗頭需要精確調整吸液高度。


3. 洗板技術:
洗滌量:根據試劑盒推薦,調整至足夠覆蓋整個反應孔壁的量。
吸液操作:垂直倒液,迅速、干脆,避免手腕左右搖擺或旋轉。
殘留液體:殘留量越少,背景信號越低,但需避免吸頭壓得太緊導致吸液效率降低。

4. 洗液配方:
非離子型洗滌劑:如吐溫20,濃度在0.05%~0.2%之間,過高會解吸附抗原或抗體。
流水沖洗:適用于微量滴定板,增加水流量或水壓可增強洗滌效果,但需注意防止孔間污染。

5. 洗滌緩沖液:
配制:使用新鮮無污染的蒸餾水或去離子水配制,避免結晶影響。
使用:現配現用,確保洗液新鮮。

6. 洗滌后的處理:
拍干:拍干后應盡快進行下一步操作,減少暴露時間以防止酶失活。
板布局:記錄每次洗滌的順序,確保每個孔的顯色時間一致。

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